Титр антител к нуклеарным антигенам (антинуклеарный фактор) в сыворотке крови
У здоровых людей титр АТ к нуклеарным Аг в сыворотке крови 1:40-1:80 (клинически значимый титр — >1:160 при использовании метода непрямой имму-нофлюоресценции; при использовании скрининговых методов — ниже 1:50).
Антинуклеарный фактор — АТ к цельному ядру. Это гетерогенная группа аутоантител, реагирующих с различными компонентами ядра. Определение АТ к нуклеарным Аг в сыворотке крови — тест на системные заболевания соединительной ткани. Скрининг на наличие антинуклеарных АТ в сыворотке крови проводят методом радиоиммунного анализа (РИА), реакции связывания комплемента (РСК) или ИФА.
Положительные результаты скрининга должны быть подтверждены методом непрямой иммунофлюоресценции. В качестве клеточного субстрата используют препараты, приготовленные из суспензии клеток с крупными ядрами [из человеческих клеток линии НЕр-2 (human epithelial cells) — клетки рака гортани, или срезов мышиной печени]. Тип окрашивания (характер распределения флюоресцентной метки в клетках) при разных заболеваниях неодинаков и определяет направление дальнейшего установления специфичности антинуклеарных АТ .
■ Диффузное окрашивание (равномерное распределение метки) наименее специфично, возможно при СКВ, лекарственном волчаночном синдроме и других аутоиммунных заболеваниях, а также у пожилых лиц. При диффузном окрашивании клеток реакцию необходимо повторить с большим разведением исследуемой сыворотки крови. Если тип окрашивания остаётся прежним, наиболее вероятно, что Аг, против которого направлены антинуклеарные АТ, дезоксирибонук-леопротеид.
■ Гомогенное или периферическое окрашивание наблюдают, когда в исследуемой сыворотке крови преобладают АТ к двухспиральной ДНК. Этот тип окрашивания наиболее часто обнаруживают при СКВ.
■ Пятнистое или крапчатое окрашивание обусловлено АТ к экстрагируемым ядерным Аг и обычно наблюдается при смешанном заболевании соединительной ткани, синдроме Шёгрена, лекарственном волчаночном синдроме.
■ Ядрышковое (нуклеолярное) окрашивание (распределение метки в районе ядрышек) обусловлено АТ к рибонуклеопротеиду . Этот тип окрашивания характерен для системной склеродермии, изредка возможен и при других аутоиммунных заболеваниях.
■ Центромерное или дискретное крапчатое окрашивание обусловлено АТ к центромере (специализированный домен хромосом) и характерно для CREST-синдрома и других аутоиммунных ревматических заболеваний.
Основная цель исследования на антинуклеарные АТ — выявление СКВ, поскольку при этом заболевании они появляются в сыворотке крови 95% больных в течение 3 мес после его начала.
Определение АТ к нуклеарным Аг имеет большое значение для диагностики коллагенозов. При узелковом полиартериите титр (при использовании скрининговых методов) может увеличиваться до 1:100, при дерматомиози-те — до 1:500, при СКВ — до 1:1000 и выше. При СКВ тест на выявление антинуклеарного фактора обладает высокой степенью чувствительности (89%), но умеренной специфичностью (78%) по сравнению с тестом на определение АТ к нативной ДНК (чувствительность 38%, специфичность 98%). АТ к нуклеарным Аг высокоспецифичны для СКВ. Сохранение высокого уровня АТ в течение длительного времени — неблагоприятный признак. Снижение титра предвещает ремиссию или (иногда) летальный исход.
При склеродермии частота выявления АТ к нуклеарным Аг составляет 60-80%, однако титр их ниже, чем при СКВ. Между титром антинуклеар-ного фактора в крови и степенью тяжести заболевания взаимосвязь не прослеживается. При ревматоидном артрите часто выделяют СКВ-подобные формы течения, поэтому довольно часто выявляют АТ к нуклеарным Аг. При дерматомиозите АТ к ядерным Аг в крови обнаруживают в 20-60% случаев (титр до 1:500), при узелковом полиартериите — в 17% (1:100), при болезни Шёгрена — в 56% при сочетании с артритом и 88% случаев при синдроме Гужеро-Шёгрена. При дискоидной красной волчанке антинук-леарный фактор выявляют у 50% больных.
Помимо ревматических заболеваний, АТ к ядерным Аг в крови обнаруживают при хроническом активном гепатите (в 30-50% случаев), причём
Рис. Алгоритм диагностики ревматических заболеваний [Lehman C.A.,1998]
Рис. Алгоритм диагностики ревматических заболеваний [Lehman C.A.,1998]
их титр иногда достигает 1:1000. Аутоантитела к нуклеарным Аг могут появиться в крови при инфекционном мононуклеозе, острых и хронических лейкозах, приобретённой гемолитической анемии, болезни Вальденстрёма, циррозе печени, билиарном циррозе печени, гепатитах, малярии, лепре, ХПН, тромбоцитопениях, лимфопролиферативных заболеваниях, миастении и тимомах.
Почти в 10% случаев антинуклеарный фактор обнаруживают у здоровых людей, но в низком титре (не более 1:50).
В последние годы был разработан иммуноферментный метод определения антинуклеарных АТ различного спектра, который отличается простотой выполнения и постепенно вытесняет иммунофлюоресцентный метод.
Целый ряд ЛС может приводить к ложноположительному повышению титра антинуклеарных АТ: аминосалицилаты, карбамазепин, изониазид, метилдопа, прокаинамид, иодиды, пероральные контрацептивы, тетрацик-лины, тиазидные диуретики, сульфаниламиды, нифедипин, р-адренобло-каторы, гидралазин, пеницилламин, нитрофурантоин и др., вследствие способности этих препаратов вызывать интерференцию при проведении исследования.